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奧林巴斯顯微鏡,熒光和生物發(fā)光蛋白

2020-09-04 09:51:40

 生物體的廣譜能夠通過(guò)生化機(jī)制,包括螢火蟲(chóng),水母和某些細(xì)菌發(fā)光的。 一些這些生物體的發(fā)射光通過(guò)吸收特定波長(zhǎng)的光,而其他通過(guò)消耗身體內(nèi)儲(chǔ)存的能量發(fā)射光。

熒光蛋白通過(guò)吸收和重新發(fā)射的光的能量發(fā)出熒光。 水母,珊瑚,??湍承┘?xì)菌有自己的身體內(nèi)這種蛋白質(zhì)。 另一方面,生物發(fā)光來(lái)源于體內(nèi)的化學(xué)反應(yīng);實(shí)例包括夜光屬的螢火蟲(chóng)和物種。 發(fā)光物質(zhì)要么是位于細(xì)胞(螢火蟲(chóng)和夜光 )內(nèi)或分泌到外部(Cypridinacea)。 雖然蛋白質(zhì)參與這些化學(xué)反應(yīng),該蛋白本身并不直接發(fā)光。

奧林巴斯顯微鏡

兩個(gè)熒光蛋白和生物發(fā)光被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究中的應(yīng)用。 成千上萬(wàn)的材料已經(jīng)收集到的領(lǐng)域。 雖然只有少量的蛋白質(zhì),已被提取這樣的研究,蛋白質(zhì)已可通過(guò)化學(xué)合成或基因工程。 是綠色熒光蛋白(GFP)及其變體的基因的市售的和被施加在細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域。

熒光蛋白

  • 綠色熒光蛋白和變體 :BFP,CFP,GFP,YFP和DsRedFP

  • 藻膽蛋白 :B-藻紅蛋白(B-PE),R-藻紅蛋白(R-PE),和別藻藍(lán)蛋白(APC)

天然存在于水母的綠色熒光蛋白,在第65個(gè)至第67個(gè)位置的氨基酸已發(fā)現(xiàn)通過(guò)紫外線或藍(lán)色光激發(fā)以發(fā)射熒光(DsRed的是在??业剑?。 GFP基因用于研究在細(xì)胞水平上通過(guò)其在細(xì)胞中的表達(dá),以可視化或追蹤活動(dòng)。

藻膽蛋白是從細(xì)菌和藻類(lèi)獲得的。 這些蛋白質(zhì)含有共價(jià)連接熒光團(tuán)。 樣品標(biāo)記有藻膽蛋白,主要用于流式細(xì)胞儀,也可以在顯微鏡下觀察。

激發(fā)和發(fā)射特性 
熒光蛋白的
熒光蛋白 
波長(zhǎng)(nm)
發(fā)射 
波長(zhǎng)(nm)
GFPwt(Wild Type395/475510
ECFP433475
EGFP488507
EYFP513527
DsRed558583
B-PE545/565575
R-PE410/545/565578
APC650660
表1

生物發(fā)光蛋白

  • 水母

  • 熒光素-熒光素酶

間的生物發(fā)光蛋白,水母發(fā)光蛋白和熒光素是兩種*常用的生物學(xué)研究。 水母發(fā)光蛋白是一種生物發(fā)光蛋白復(fù)合物分離自水母和鈣離子濃度的測(cè)定中使用。 它包括蛋白質(zhì)apoaequorin和潛伏發(fā)光分子。 當(dāng)鈣離子結(jié)合的水母發(fā)光蛋白,復(fù)分解成apoaequorin和發(fā)光分子,其發(fā)出藍(lán)色光(約466納米)。 與使用熒光染料的探針的測(cè)量,使用水母發(fā)光蛋白的鈣離子濃度的測(cè)量不需要激勵(lì)和不受自體熒光。 合成apoaequorin是目前可從幾個(gè)來(lái)源。 該apoaequorin基因也可以通過(guò)其在線粒體中表達(dá)所用的鈣離子濃度的測(cè)量。

熒光素是從螢火蟲(chóng)獲得的生物發(fā)光分子,它發(fā)出的光的發(fā)光時(shí),它是由一種酶(蛋白質(zhì))命名的熒光素酶(波長(zhǎng)長(zhǎng)達(dá)560納米)的氧化。 因?yàn)锳TP是不可或缺的螢火蟲(chóng)的螢光素 - 熒光素酶反應(yīng),該反應(yīng)被用于一個(gè)ATP檢測(cè)試劑盒,具有非常高的靈敏度。 這樣的ATP檢測(cè)試劑盒都可以買(mǎi)到。 熒光素酶基因也被分離,并且可以在細(xì)胞內(nèi)被表達(dá)。