在黑白攝影通過(guò)顯微鏡，過(guò)濾器主要用于控制在電影拍攝最終圖像的對(duì)比度。 這是高度分化的，相對(duì)于從生物污漬彩色元素標(biāo)本被翻譯成灰色的黑白膠片的色調(diào)，常常會(huì)出現(xiàn)有相同的亮度。 當(dāng)這種情況發(fā)生時(shí)，重要的標(biāo)本細(xì)節(jié)可以通過(guò)缺乏對(duì)比度會(huì)丟失。 過(guò)濾技術(shù)的黑白電影顯著有別于那些顏色顯微攝影使用。

要使用黑白顯微更好的圖像樣本，過(guò)濾器通常采用有選擇地吸收一種或幾種顏色，使用具有相同的靈敏度，以多個(gè)漬色全色膠片時(shí)尤其如此。 許多染色生物標(biāo)本表現(xiàn)出很淡的顏色背景明亮（使用透射明視場(chǎng)光學(xué)顯微鏡），記錄在黑白膠片拍攝時(shí)，將出現(xiàn)一個(gè)白色的背景為淺灰******調(diào)。 以提高對(duì)比度，彩色濾光器被添加到吸收染色的樣品顏色的顯微鏡光路中，將其定為暗灰色。 對(duì)比度可以以這種方式通過(guò)選擇性地選擇吸收不同量的污漬顏色的過(guò)濾器進(jìn)行調(diào)整。 這個(gè)概念進(jìn)行了探討與沾有含番紅為O（漬核，染色體，木質(zhì)化和cutinized細(xì)胞壁紅色），固綠（漬四倍混合染色圖1給出的顯微照片，它說(shuō)明了一個(gè)薄的馬鈴薯 （土豆）節(jié)細(xì)胞質(zhì)和纖維素的細(xì)胞壁綠色），結(jié)晶紫（漬淀粉粒紫色），和橙G（漬嗜酸性細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞壁黃色變?yōu)榫G色）。

在圖1所示的顯微照片（a）采取了與明照明，并使用富士正片64T透明色（反轉(zhuǎn)）膜中性密度濾光片。 此圖片顯示的淀粉粒與番紅O和結(jié)晶紫染色主要塊莖矩陣，而標(biāo)本的其余部分由纖維素和綠色的染色與固綠和橙G。圖1（b）顯示了相同的拍攝現(xiàn)場(chǎng)使用細(xì)胞壁柯達(dá)的T-100最大（連續(xù)色調(diào)全色黑與白負(fù)片），但與柯達(dá)雷登25號(hào)紅色濾光片（見(jiàn)表2）插入顯微鏡光路。 試樣的紅色區(qū)域由過(guò)濾器，其中還介紹了在被染成藍(lán)色和綠色的標(biāo)本細(xì)節(jié)反差太大降低對(duì)比度。

柯達(dá)數(shù)字47B藍(lán)色濾光片置于顯微鏡的光路為記錄在圖1（c）中所示的顯微照片。 有了這個(gè)過(guò)濾器，淀粉粒已經(jīng)獲得增強(qiáng)的對(duì)比度，但標(biāo)本的綠化面積正喪失對(duì)比度和細(xì)節(jié)。 圖1（d）示出了當(dāng)一個(gè)柯達(dá)數(shù)字濾波器58（綠色）被置于光路中的檢體。 時(shí)相比，圖1（b）該綠色濾波器增加了淀粉顆粒的對(duì)比度，但會(huì)降低在染色用綠色染料區(qū)域的對(duì)比度。 整體對(duì)比度進(jìn)行優(yōu)化，在圖1（d）給出的顯微照片。

作為一般規(guī)則，采用彩色濾光片的黑白顯微攝影時(shí)，利用過(guò)濾器是免費(fèi)贈(zèng)送給標(biāo)本染******（它們吸收了大部分的污點(diǎn)傳播的主要波長(zhǎng)），以最大限度地提高最終圖像的對(duì)比度量。 為了達(dá)到對(duì)比中等水平，使用過(guò)濾器，只有部分吸收最感興趣的功能顯示的顏色。 最后，為了降低反差降至最低，使用有顏色的那些相同的試樣的過(guò)濾器。 過(guò)濾器的組合可以被用來(lái)提高在標(biāo)本染色與一個(gè)以上的色彩細(xì)節(jié)的對(duì)比度。

表1可以被看作是一個(gè)條形圖的匯編較常見(jiàn)的生物污垢的吸收光譜。

大多數(shù)生物標(biāo)本缺乏足夠的顏色和對(duì)比度使用明場(chǎng)照明，以容易地成像在光學(xué)顯微鏡下。 這些樣品通常不吸收可見(jiàn)光任何大的程度（它們不是好的振幅標(biāo)本），并且可以被看作是一個(gè)粗略輪廓的一些內(nèi)部細(xì)節(jié)僅當(dāng)聚光鏡孔徑尺寸減小了，常常引入光學(xué)構(gòu)件的點(diǎn)。 為了解決這個(gè)問(wèn)題，經(jīng)常顯微鏡治療生物細(xì)胞和組織反應(yīng)性的有機(jī)染料會(huì)選擇性地染色和顏色的生物體系結(jié)構(gòu)的各個(gè)部分是。 因?yàn)楸尘巴鶗?huì)出現(xiàn)白色或非常淺的灰色在明顯微鏡，染色的組織會(huì)出現(xiàn)彩色的，疊加在淺色背景。 這是常常足以使感興趣的可見(jiàn)的細(xì)節(jié)和有足夠的對(duì)比度，以提供良好的顯微照片。

在許多情況下，不同顏色的兩個(gè)或更多的污漬進(jìn)行組合，以幫助該躺靠在一起的蜂窩單元之間區(qū)分，產(chǎn)生了顏色對(duì)比度，從另外一個(gè)分開(kāi)的一個(gè)元素。 例如，細(xì)胞的細(xì)胞核可以用蘇木精，從缺口洋蘇木，其選擇性地結(jié)合到染色質(zhì)中提取的天然無(wú)色化合物。 為了提供此相反，蘇木往往是結(jié)合曙紅，紅色的熒光染料染色的各種細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)。 這兩個(gè)污漬的結(jié)合使細(xì)胞的細(xì)胞核染色被染成紅色深藍(lán)色，并具有細(xì)胞質(zhì)成分。

程序用于染色生物體組織范圍從單個(gè)細(xì)胞與染料非常簡(jiǎn)單的混合物，以消耗大量的時(shí)間和材料復(fù)雜的多步驟的組織切片工序。 涂片通?？梢酝ㄟ^(guò)簡(jiǎn)單地丟棄染色和固色劑的混合物到含有細(xì)胞進(jìn)行檢查培養(yǎng)管被污染。組織切片是更困難的，并且需要幾個(gè)固定劑和被放置在顯微鏡載玻片上，并通過(guò)染色和洗滌液的色域運(yùn)行之前，切片的步驟。

大多數(shù)的污漬是可以得到自然的或在實(shí)驗(yàn)室中被合成復(fù)雜的雜環(huán)有機(jī)染料。 染料的特征在于它們的紫外和可見(jiàn)吸收光譜，這是用來(lái)從另一個(gè)區(qū)分1污點(diǎn)。 一個(gè)典型的可見(jiàn)光吸收譜的三苯基甲烷染料堅(jiān)牢綠示于圖2。 阿強(qiáng)吸收帶集中在620納米過(guò)濾掉大部分的紅色光波只留下綠色和藍(lán)色的。 快綠是用來(lái)選擇性地染色膠原蛋白，粘液，和植物細(xì)胞壁帶負(fù)電荷的（陰離子）染料，渲染這些結(jié)構(gòu)藍(lán)綠色到深綠色。 顯然，使用有機(jī)染料著色的生物組織時(shí)，染色的吸收特性，必須加以考慮。

污垢選擇性是由染料分子相對(duì)于它們與細(xì)胞成分相互作用的化學(xué)和電子性質(zhì)來(lái)確定。 具有凈正電荷的水溶液或緩沖溶液的污漬會(huì)選擇性地附著或結(jié)合到帶負(fù)電荷的生物結(jié)構(gòu)。 親水性污漬將趨于弄臟水合生物組件，例如蛋白質(zhì)和核酸的外部。 污漬與疏水特性將分割成的膜，脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的內(nèi)部。 生物組織選擇的污漬時(shí)，這些屬性應(yīng)該被銘記。

常見(jiàn)的生物污垢以及它們的可見(jiàn)光吸收特性的匯編在表1中。 使用顯微鏡染色生物組織的染料具有廣泛的色彩范圍，從深藍(lán)色到明亮的紅色，用中間色也可無(wú)數(shù)。 檢查表后，將成為明顯的是，許多染料具有相似的光譜特性，并在乍看之下，這似乎是相似的染料可以互換使用染色生物標(biāo)本。 在許多情況下，類似的染料可被取代的無(wú)不良影響，但在某些情況下，替代染料可在不可預(yù)見(jiàn)的方式，得到不理想的結(jié)果與其它染料或生物結(jié)構(gòu)進(jìn)行交互。 這是常見(jiàn)的，其中的染料的化學(xué)和物理性質(zhì)，必須精細(xì)地調(diào)諧并匹配彼此復(fù)雜污垢的混合物。通常，取代基的一種染料的另一個(gè)顯著地改變了混合物的染色性能。

如上面所提到的，許多染料具有相似的顏色和光譜性能。 然而，在他們的可見(jiàn)吸收光譜仔細(xì)檢查，出現(xiàn)類似的染料往往顯著變化在它們的光吸收曲線。 作為一個(gè)例子，我們可以比較它們似乎是相同或幾乎相同的光譜特征三個(gè)紅色染料：達(dá)羅紅，番紅O和蘇丹紅IV。 對(duì)三種染料的可見(jiàn)光吸收光譜示于圖3。 雖然所有三種染料強(qiáng)烈吸收在430至580納米（藍(lán)綠色）區(qū)和發(fā)射紅色波長(zhǎng)的光，其主要的吸收最大值高達(dá)40毫微米不同。 光譜寬度和波長(zhǎng)吸收分布也不同遍及三個(gè)光譜。 達(dá)羅紅色的強(qiáng)烈吸收波長(zhǎng)在400到460納米范圍內(nèi)，但番紅O有少許吸收在這個(gè)區(qū)域。 番紅澳的吸收光譜也移動(dòng)20納米朝著在580-600納米的區(qū)域更長(zhǎng)的波長(zhǎng)。

三種染料的電子，化學(xué)和物理性質(zhì)發(fā)生變化比的吸收譜，甚至更多。 番紅O是非常易溶于水，但在其它兩種染料是僅微溶于水或緩沖溶液。 此外，達(dá)羅紅和番紅O為陽(yáng)離子染料（他們有一個(gè)凈正電荷），而蘇丹IV是不帶電和中性。 通過(guò)三種染料有針對(duì)性的生物結(jié)構(gòu)也各不相同。 達(dá)羅紅是專門用于含有核酸RNA和DNA，番紅?污漬核和細(xì)胞壁的組件結(jié)構(gòu)，以及蘇丹IV是選擇性的脂質(zhì)和存在于細(xì)胞和組織中的脂肪物質(zhì)。 考慮到這些事實(shí)考慮，很明顯，這三個(gè)染料是不可互換的，并可能產(chǎn)生混亂，如果他們?cè)谂c其他染料的混合物相互替代。

在黑色和白色顯微圖像對(duì)比度優(yōu)化需要仔細(xì)調(diào)整可見(jiàn)光穿過(guò)樣品，并在膠片上乳液。 為了提供試樣的元素和背景之間的適當(dāng)?shù)囊曈X(jué)差別，兩種染料和彩色濾光片的可見(jiàn)光光譜特性的工作知識(shí)是至關(guān)重要的。 常見(jiàn)的生物污漬吸收光譜發(fā)表在各種來(lái)源，但有兩個(gè)最好的作品都是污漬，染料和指標(biāo)Sigma-Aldrich公司手冊(cè)和HJ康恩的生物染色劑 。 表1包含了最常用的生物污垢和有用的可見(jiàn)光透過(guò)率為每個(gè)染料的光譜范圍的列表。

彩色濾光片可從玻璃支架或明膠正方形的形式專業(yè)攝影的供應(yīng)商和顯微鏡制造商。 最流行 的一系列的過(guò)濾器黑白顯微攝影是柯達(dá)雷登明膠濾鏡，這是索引與一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的編號(hào)系統(tǒng)（見(jiàn)表2）。 這些過(guò)濾器是非常適合與大量的有機(jī)染料可用，每一個(gè)都可以被精確地標(biāo)準(zhǔn)化與染料的每單位面積的存在量臨界顯微攝影。 由其他制造商生產(chǎn)的過(guò)濾器可以被引用到柯達(dá)的編號(hào)系統(tǒng)，建立等效的過(guò)濾性能。

在雷登過(guò)濾器是由明膠薄膜混合適當(dāng)?shù)娜玖虾屯渡涞焦鈱W(xué)級(jí)玻璃板，然后讓其變硬。 硬化膜從玻璃板剝離，并涂有一薄層清漆的保護(hù)。 雷登過(guò)濾器很容易修剪用剪刀來(lái)允許修改放置在顯微鏡濾光片架。 雖然薄漆涂層能提供一些保護(hù)脆弱的過(guò)濾器，他們應(yīng)該小心握住的角落，以避免磨損和污垢和油脂從皮膚上堆積處理。 過(guò)濾器也應(yīng)受到保護(hù)，用玻璃過(guò)濾器熱，從由顯微鏡燈產(chǎn)生過(guò)多的熱量。 持續(xù)暴露于熱過(guò)度延長(zhǎng)的時(shí)間期間可引起篩選褪色。 雷登過(guò)濾器可以用駝毛刷和壓縮空氣進(jìn)行清潔，但不應(yīng)該放置在溶劑或水，以避免腫脹直接接觸。

過(guò)濾器可以被放置在多個(gè)點(diǎn)在顯微鏡的光路。 許多現(xiàn)代顯微鏡具有定位在燈箱與底座之間的載波，將持有數(shù)的過(guò)濾器。 較舊的顯微鏡往往正好位于臺(tái)下聚光器下方的過(guò)濾器載體。 避免將明膠濾光片上的顯微鏡光端口或近共軛平面（近場(chǎng)光闌或試樣），以防止劃痕和其它瑕疵從被聚焦在與場(chǎng)光闌葉片試件的平面上的任意點(diǎn)。

當(dāng)過(guò)濾器被添加到該光路中，膠片的曝光時(shí)間必須調(diào)整（通常是增加），由過(guò)濾器，以補(bǔ)償光的吸收。 每個(gè)過(guò)濾器都有一個(gè)使用該過(guò)濾器時(shí)（見(jiàn)表2）作為一個(gè)粗略的指南，曝光調(diào)整指定的過(guò)濾因子 。 各種條件下一起工作以影響對(duì)曝光的影響由給定的過(guò)濾器，包括該膜的光譜靈敏度，光源的顏色溫度，試樣和污垢的可見(jiàn)吸收光譜。

對(duì)于任何給定的過(guò)濾器的過(guò)濾因子能夠而且應(yīng)該通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。 選擇一個(gè)標(biāo)本，有一個(gè)大面積的中性灰色的背景，并采取幾個(gè)測(cè)試曝光無(wú)過(guò)濾器的地方。 這是明智的支架顯微照片整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。 下一步，將過(guò)濾器中的光路，并作出一系列曝光，在三分之一提高到二分之一光圈為單位，通過(guò)更多地接觸兩到四站，取決于過(guò)濾器的密度。 選擇最佳的顯微照片后，比較的曝光數(shù)據(jù)，并確定從兩次曝光產(chǎn)生相等的密度之間的曝光時(shí)間的差的濾波系數(shù)。

因?yàn)樽詣?dòng)攝像系統(tǒng)將彌補(bǔ)增加的密度，當(dāng)過(guò)濾器被放置在光路中，通常不需要過(guò)濾因子暴露加法。 然而，在許多情況下，在光電倍增管或光電二極管可以測(cè)量入射光強(qiáng)度的相機(jī)光譜感光度的細(xì)微差別可能導(dǎo)致不正確的風(fēng)險(xiǎn)。 深色的過(guò)濾器可能會(huì)略有取代顯微鏡焦點(diǎn)，由于物鏡的光學(xué)特性，所以仔細(xì)添加過(guò)濾器的光路后，檢查重點(diǎn)。 始終目視檢查的最終顯微照片和手動(dòng)執(zhí)行任何必要的調(diào)整。

干涉濾光器也可以被利用，以提高在黑白顯微攝影反差。 這些過(guò)濾器使用多個(gè)蒸發(fā)薄層金屬合金的光學(xué)級(jí)玻璃制成，高度精確的相對(duì)光譜透射和吸收特性。 干涉濾光器由波長(zhǎng)帶所發(fā)送的兩個(gè)中心和寬度指定。 它們是商業(yè)上可從光學(xué)元件供應(yīng)商或從顯微鏡的制造商。

表2可以被看作是一個(gè)柱狀圖的編制較柯達(dá)雷登過(guò)濾器用于黑白攝影的傳輸特性。

可供選擇的過(guò)濾器和污漬為黑白顯微攝影的目的，在可見(jiàn)光光譜可分為三個(gè)主要區(qū)域，這在于在400至700納米之間的波長(zhǎng)范圍內(nèi)。 400和500納米之間的波長(zhǎng)時(shí)，一起觀看視覺(jué)上顯示為藍(lán)色的光。 同樣地，500和600納米之間的波長(zhǎng)呈現(xiàn)綠色，而這些600和700納米之間顯示為紅色。 能吸收400至500納米之間的所有波長(zhǎng)的染料將通過(guò)僅較長(zhǎng)的波長(zhǎng)500和700納米（綠色和紅色光）之間，且會(huì)出現(xiàn)黃色，這是由混合的綠光和紅光等分得到的初級(jí)減色。 如果染料400和500納米之間的光透射和吸收光的波長(zhǎng)較長(zhǎng)（500至700納米），那么它會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色。（本文來(lái)源：奧林巴斯顯微鏡，過(guò)濾器黑白顯微攝影）

作為一個(gè)例子，我們將研究剛果紅（見(jiàn)表1），具有很強(qiáng)的吸收區(qū)域400和560納米之間的吸收光譜。 藍(lán)燈波長(zhǎng)400至500納米的下降是由剛果紅吸收，因?yàn)槭菙[在500和560納米之間的綠光波長(zhǎng)。 560和700納米之間只有較長(zhǎng)的波長(zhǎng)是由染料傳遞的，所以染料出現(xiàn)視覺(jué)上為紅色。 甲苯胺藍(lán)和臺(tái)盼藍(lán)兩個(gè)發(fā)射藍(lán)色波長(zhǎng)和吸收更長(zhǎng)波長(zhǎng)的光，然而兩種染料出現(xiàn)有稍微不同的色彩對(duì)人的眼睛。 這是因?yàn)榕_(tái)盼藍(lán)吸收高于500納米波長(zhǎng)的一切，而甲苯胺藍(lán)只吸收上述560納米波長(zhǎng)的那些，并通過(guò)綠色波長(zhǎng)的區(qū)域500和560納米之間。 因此，臺(tái)盼藍(lán)出現(xiàn)了深刻，豐富的藍(lán)色，而甲苯胺藍(lán)似乎在視覺(jué)上是一個(gè)藍(lán)綠色。 在普通染料的可見(jiàn)光吸收光譜的差異（見(jiàn)表1）允許顯微鏡有很大的自由度去選擇生物污漬時(shí)，選擇合適的光譜范圍。

過(guò)濾器相同的方式運(yùn)作，相對(duì)于可見(jiàn)光的染料。 柯達(dá)數(shù)字濾波器38A發(fā)射360和570納米之間的波長(zhǎng)，涵蓋了藍(lán)色和綠色。 類似的過(guò)濾器，柯達(dá)數(shù)39，也是一個(gè)藍(lán)色的過(guò)濾器，但傳輸或通過(guò)310和480納米之間的波長(zhǎng)。像臺(tái)盼藍(lán)和甲苯胺藍(lán)，這兩個(gè)過(guò)濾器通過(guò)光略有不同的色調(diào)。 該傳輸所有的2光譜區(qū)域或大部分，但是阻止三分之一（例如柯達(dá)39濾波器）濾波器通常被稱為減去濾波器。 數(shù)字濾波器39有時(shí)也被稱為減藍(lán)濾光器，因?yàn)樗悄軌驈目梢?jiàn)光光譜阻止或減，藍(lán)色波長(zhǎng)的光。 以類似的方式，一個(gè)數(shù)字濾波器32顯示品紅的眼睛，并且被稱為減去綠色，因?yàn)樗盏木G色光在500至600納米的區(qū)域。 32號(hào)過(guò)濾器在320?500和600 +納米范圍，這加在一起，產(chǎn)生的顏色洋紅色透射藍(lán)光和紅光。

當(dāng)配置在顯微鏡對(duì)染色標(biāo)本的黑白顯微攝影，可以很方便地指無(wú)論在染色中使用的染料和用于控制對(duì)比度的濾光片的可見(jiàn)吸收光譜。 圖4示出了一系列的過(guò)濾器用于控制與染料堿性品紅（圖4（a）），其強(qiáng)烈地吸收在520至570納米波段的光，并出現(xiàn)紅品紅到眼睛的對(duì)比度。 堿性品紅的吸收光譜表明，吸收了藍(lán)色波長(zhǎng)在這一地區(qū)的一部分（但不是全部）460和500納米之間的肩膀。 這肩部負(fù)責(zé)輕微的紅******調(diào)出現(xiàn)在偏離真正的品紅色染料。

對(duì)比從沾滿堿性品紅生物標(biāo)本制作顯微照片將取決于過(guò)濾器的選擇。 一種過(guò)濾器，是相輔相成的染料將吸收所有的染料發(fā)射的波長(zhǎng)或大部分。 這種效應(yīng)被認(rèn)為是在圖4（b）如堿性品紅的吸收光譜和柯達(dá)數(shù)58過(guò)濾器疊加。 350和500納米和紅色波長(zhǎng)大于600納米之間的藍(lán)光波長(zhǎng)是由過(guò)濾器吸收，對(duì)黑白膠片拍攝，得到的顯微照片對(duì)比量最大時(shí)變暗染色區(qū)域。

當(dāng)使用過(guò)濾器，其具有透射率范圍比染色的吸收區(qū)域更寬，如圖4（C）發(fā)生的污垢較少變黑。 黃色號(hào)碼12柯達(dá)濾波器，其傳輸所有可見(jiàn)光波長(zhǎng)大于500納米，的吸收光譜疊加在堿性品紅頻譜如圖4（c）所示。 該過(guò)濾器的剪輯部分在450到510納米區(qū)域的染料的波長(zhǎng)，產(chǎn)生的所得顯微照片對(duì)比適量。

污漬的極小變黑可以通過(guò)選擇在同一個(gè)區(qū)域吸收光的染料的濾波器來(lái)實(shí)現(xiàn)。 柯達(dá)47B濾波器具有一個(gè)可見(jiàn)吸收光譜中波長(zhǎng)分配到堿性品紅（圖4（d））類似，并且將產(chǎn)生的顯微照片以比數(shù)12和58的過(guò)濾器的對(duì)比度以下。 其他污漬可以比作以微調(diào)黑白顯微攝影顯微鏡照明器以類似的方式。

比較染色/過(guò)濾器組合黑白顯微照片是理解過(guò)濾的顯微攝影的概念有幫助的。 如圖5所示，有兩個(gè)例子，其中樣品的對(duì)比度顯著，通過(guò)使用互補(bǔ)濾波器的增加。 圖5（a）和（b）是染色的人回腸（腸）組織未經(jīng)過(guò)濾器截取的顯微照片（圖5（a））和與該吸收大部分的染料顏色的（圖5（b））的過(guò)濾器。 在這種情況下，污垢是非常淺的，并且需要一些調(diào)整，以允許所述組織可以從背景中區(qū)分。 由濾波器產(chǎn)生的對(duì)比度增加有助于試樣站出來(lái)對(duì)灰色背景由發(fā)黑試樣顏色而不顯著影響的背景。 在圖5的（c）和（d）的顯微照片是使用過(guò)濾器，以促進(jìn)標(biāo)本對(duì)比度的另一個(gè)例子。 海星睪丸的染色薄款（圖5（c））變黑（圖5（d））時(shí)，免費(fèi)的過(guò)濾器被添加到顯微鏡的光路。 昏暗的污點(diǎn)有助于揭示細(xì)胞間結(jié)構(gòu)，這些染色切片的細(xì)節(jié)，但必須在過(guò)濾器選擇的做法，以避免反差太大。

過(guò)濾器還可以用于增強(qiáng)對(duì)比度并在標(biāo)本染色用多于一種顏色提供細(xì)節(jié)。 在圖6所示的顯微照片（a）和（b）示出的薄人肺組織患支氣管肺炎的部分。 未經(jīng)過(guò)濾（圖6（a）），背景是暗并往往掩蓋重要標(biāo)本細(xì)節(jié)在肺組織。 用適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾（圖6（b）），背景，這是不重要的，是減輕和含有的最重要的信息的試樣的那部分變得更加明顯。 確切的數(shù)量和類型的過(guò)濾來(lái)優(yōu)化這種效果，必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。

減輕污漬顏色，或以補(bǔ)償過(guò)染色的樣品，具有相同顏色的污垢，應(yīng)插入顯微鏡光路中的過(guò)濾器。 圖6（c）示出了椴木莖感染了真菌禾柄銹菌的重染色薄切片。 色斑是這么厚的噴發(fā)膿包的細(xì)節(jié)模糊，但這個(gè)偽像在圖6（d）加入含有相同的吸收特性作為膿包濾波器補(bǔ)償。 在這種情況下，減輕污漬有助于降低圖像的對(duì)比度和揭示了過(guò)多污垢被掩蓋了細(xì)節(jié)。

通過(guò)使用過(guò)濾器采用對(duì)比度控制，應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待。 最終的圖像取決于雙方的適當(dāng)選擇濾波器和一個(gè)判定哪些試樣的部分應(yīng)調(diào)整。 反差太大可能使局勢(shì)惡化，而太少的對(duì)比結(jié)果往往缺乏足夠的細(xì)節(jié)圖像是有用的。 我們建議廣泛的實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察濾波器到位試樣并通過(guò)比較濾波器的傳輸和污漬吸收特性。 通常，結(jié)果是可以通過(guò)將不同的過(guò)濾器入光路，直至達(dá)到最佳的對(duì)比度實(shí)現(xiàn)加以改進(jìn)。 黑白膠片是價(jià)格相對(duì)便宜，所以測(cè)試各種過(guò)濾器通過(guò)將全色片盡可能多地獲得的結(jié)果。

柯達(dá)彩色濾光片圈（圖7）包含有關(guān)開(kāi)始使用全色膠片對(duì)比度調(diào)節(jié)點(diǎn)的信息。 選擇彩色濾光片時(shí)，以提高樣本的對(duì)比度和背景區(qū)分重要的細(xì)節(jié)，此圖應(yīng)作為指導(dǎo)。 因?yàn)槿旧念伾推淇梢?jiàn)吸收光譜有很大的不同，最終的過(guò)濾器的選擇將取決于樣品和污漬或污垢的混合物時(shí)。 全色感光乳劑，會(huì)有不同的反應(yīng)，以紅，綠，藍(lán)三種光，并應(yīng)記錄重要數(shù)據(jù)之前進(jìn)行徹底的測(cè)試。 在一般情況下，一個(gè)黃綠色濾光器，如柯達(dá)號(hào)碼11，應(yīng)使用以建立正確的灰度色調(diào)乘法染色標(biāo)本。 當(dāng)使用日光照明（氙氣燈或光閃光管），插入一個(gè)黃色8號(hào)過(guò)濾器，以補(bǔ)償這種色溫較高比例的藍(lán)色光存在的。 有些全色薄膜具有高靈敏度的紅色，應(yīng)該用13號(hào)濾波器鎢鹵素?zé)粽彰骰?1號(hào)過(guò)濾器日光照明使用。 應(yīng)當(dāng)提到，這些過(guò)濾器是專門用于黑白顯微攝影，并不能與彩色膠片使用。在表3中列出的濾波器的建議提供在選擇過(guò)濾器的對(duì)比度增強(qiáng)的起點(diǎn)。

偶爾，防污組合抗蝕劑的嘗試，以產(chǎn)生樣品的細(xì)節(jié)和背景之間的足夠的對(duì)比度。 這發(fā)生在兩個(gè)污物的顏色也有類似的亮度值和過(guò)濾器是用來(lái)調(diào)整顯微鏡的照明色溫為黑白電影。 固化是要找到一個(gè)過(guò)濾器，將吸收的一種顏色幾乎完全而部分吸收了其他顏色，這樣既將有與背景對(duì)比度好。

因?yàn)樯锶旧珓┑念伾梢愿鶕?jù)試樣而異，但并不總是可能推薦一個(gè)特定的過(guò)濾器，即使當(dāng)在染料的光譜特性是已知的。 考慮一個(gè)青紫色斑狀結(jié)晶紫，發(fā)送兩個(gè)紅色和藍(lán)色波長(zhǎng)。 使用Kodak雷登23A淺紅濾波器與該染料將允許一些紅色波長(zhǎng)的要被發(fā)送的，但過(guò)濾器將不能完全消除顏色從染料。 類似的結(jié)果可以得到其它常見(jiàn)紅色濾光片包括雷登數(shù)字24，25，和26。 然而，所有的常見(jiàn)的紅色過(guò)濾器將徹底從一個(gè)純粹的藍(lán)色染料如甲苯胺藍(lán)吸收波長(zhǎng)。 萬(wàn)一結(jié)晶紫，深綠色濾光片（雷登編號(hào)58）可能是用于對(duì)比度增強(qiáng)的最佳選擇。 添加一個(gè)過(guò)濾器，光路后，一定要檢查繼續(xù)進(jìn)行顯微攝影之前，通過(guò)目鏡觀察樣品對(duì)比。

除了對(duì)比度控制，過(guò)濾器可以被用來(lái)克服光學(xué)象差，提高圖像的分辨率。 顯微鏡物鏡不同樣良好地校正光學(xué)象差，在整個(gè)可見(jiàn)光光譜。 在黑色和白色顯微攝影，過(guò)濾器可以被用來(lái)利用光譜那里的物鏡具有最佳性能的那一部分，從而提供最佳的圖像質(zhì)量。 消色差物鏡是在光譜的波長(zhǎng)約550納米為中心的綠色部分校正光。 在顯微鏡的照明可以通過(guò)增加綠色濾波器具有窄帶寬的光路徑（之前的樣品）取本校正因子的優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整。柯達(dá)雷登濾波器數(shù)字58，61或99可用于顯微鏡光的帶寬限制在500-600納米區(qū)域，以便使用消色差物鏡時(shí)優(yōu)化顯微攝影。 的帶寬可以進(jìn)一步通過(guò)加入黃濾光（柯達(dá)數(shù)字15或類似的）的限制。 螢石和復(fù)消色差的物鏡是更好的色差修正，不會(huì)大幅從黑白單色顯微攝影照明中受益。

過(guò)濾器還可以幫助產(chǎn)生適度增加分辨率時(shí)照明的帶寬只利用最短的可見(jiàn)光波長(zhǎng)，它趴在380-400納米的區(qū)域。另外一個(gè)柯達(dá)數(shù)字47B藍(lán)色濾光片在顯微鏡光路的波長(zhǎng)限制傳遞到標(biāo)本的400和470納米之間。 在光學(xué)顯微鏡，點(diǎn)至點(diǎn)的分辨率是根據(jù)下式計(jì)算：

其中，R是兩個(gè)結(jié)構(gòu)元件之間的最小可分辨距離，λ是照明光的波長(zhǎng)，NA是物鏡的數(shù)值孔徑。 從這個(gè)等式中，很明顯，分辨率是成正比的光的波長(zhǎng)。 更短的波長(zhǎng)導(dǎo)致較低的R值，從而以更高的分辨率。 使用這個(gè)公式，可以計(jì)算出該數(shù)值孔徑等于0.9的一個(gè)目的，分辨率將是0.39微米，對(duì)于紅光（700納米），0.31微米為綠光（550納米），和0.22微米為藍(lán)光（400納米）。 因此，為了達(dá)到最大的分辨率，而不管光學(xué)矯正為目的的程度，該顯微鏡還可以添加藍(lán)色濾光片的顯微鏡光路中。

在圖8中呈現(xiàn)的顯微照片示出了分辨率增強(qiáng)的使用帶有過(guò)濾器的黑白顯微攝影產(chǎn)生單色光的影響。 壓縮盤的表面上的微型護(hù)堤采用柯達(dá)技術(shù)潘膠片拍攝和100倍的平場(chǎng)消色差的反射光與武警在3200K色溫。左邊的顯微照片（圖8（a））是鎢 - 鹵素照明操作在不過(guò)濾從照明源只利用白光。 在右側(cè)（如圖8（b））是具有柯達(dá)數(shù)字47B插入到光路徑（藍(lán)色）濾光器制成的顯微照片。 注意護(hù)堤的增加的清晰度和銳度時(shí)由濾光器透射的藍(lán)色光照明。

過(guò)濾器的黑白顯微攝影可以是一樣重要，因?yàn)槟切┬枰陲@微攝影的色彩正確的色彩還原。 當(dāng)執(zhí)行與黑白膠片關(guān)鍵工作，時(shí)刻關(guān)注乳液的特性（它們發(fā)布在網(wǎng)絡(luò)上，或陪膜包裝），并把它們作為起點(diǎn)的過(guò)濾器選擇指南。 通過(guò)仔細(xì)地選擇合適的彩色濾光片的黑白顯微攝影，任何顯微鏡可以產(chǎn)生呈現(xiàn)足夠的對(duì)比度和顯示有關(guān)標(biāo)本的重要細(xì)節(jié)出色的黑白圖像。