經(jīng)過(guò)反卷積算法已被應(yīng)用，還原圖像可能包括明顯的文物，如條紋，振鈴，或不連續(xù)的細(xì)胞骨架染色。 在某些情況下，這些問題都涉及到數(shù)據(jù)表示，不會(huì)與不同的算法或軟件程序包發(fā)生。 當(dāng)加工參數(shù)配置不正確，對(duì)原始圖像也可能出現(xiàn)偽影。 *后，文物往往不被計(jì)算引起的，而是由組織學(xué)，光學(xué)偏差，或電子噪音。 當(dāng)試圖診斷的神器之源，*步是與反卷積圖像仔細(xì)比較原始圖像。

如果工件是在原始圖像中可見，那么它必須由因素從上游的反褶積引起的。 通過(guò)調(diào)整原始圖像的對(duì)比度和亮度，一些偽像可以顯示，并不明顯時(shí)*眼。 如果神器不存在或檢測(cè)不到的原始圖像，然后反卷積的某些方面被牽連。 在后一種情況下，它可能是有用的各種算法（例如，逆濾波器對(duì)受約束的迭代算法）進(jìn)行比較反卷積的結(jié)果。

點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的注意事項(xiàng)

點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)（PSF）的質(zhì)量是一個(gè)卷積算法的性能至關(guān)重要，應(yīng)嚴(yán)加審查。 嘈雜的，畸變，或不正確縮放的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)將會(huì)對(duì)反褶積結(jié)果的不成比例的影響。 這是為迭代技術(shù)尤其如此，因?yàn)樵擖c(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)被反復(fù)施加到計(jì)算中。 在所有情況下，模糊光在原始圖像上的分布和程度，必須對(duì)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)相匹配。 如果不匹配的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)是利用，那么文物可能導(dǎo)致或恢復(fù)的質(zhì)量可能會(huì)下降。

在許多商業(yè)反卷積軟件包，用戶可以選擇任何一個(gè)理論或?qū)嵶C的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的圖像復(fù)原。 在一般情況下，結(jié)果是，如果一個(gè)經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)采用更好，并且還有不優(yōu)先使用的理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的幾個(gè)重要的原因。 首先，盡管存在著良好的理論模型的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，它們是不**的模型，并進(jìn)行了實(shí)證的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)包含在理論模型沒有可用信息。 其次，在商業(yè)軟件包提供了理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)通常假設(shè)**的軸向和旋轉(zhuǎn)對(duì)稱的，這意味著它可能無(wú)法正確地適應(yīng)模糊在原始圖像上的分布。 這個(gè)問題是在高分辨率*嚴(yán)重（例如，與具有數(shù)值孔徑在1.2和1.4范圍內(nèi)的物鏡），其中，在所述透鏡組件或光學(xué)涂層小的制造變化可引起輕微的畸變中的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的對(duì)稱性。 一個(gè)理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)不能反映這些鏡頭的具體變化和產(chǎn)量較差反褶積的結(jié)果。 此外，一個(gè)經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)可有助于選擇合適的物鏡進(jìn)行反卷積分析。

呈現(xiàn)在圖1是一系列理論上生成的等高線圖的共聚焦點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)是逐步更深的名義焦點(diǎn)位置成水介質(zhì)。 油浸物鏡的利用率是假設(shè)，和點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的顯著軸向傳播的浸油和水，其與聚焦深度增加之間的不匹配的折射率的效果。 歸屬于在理論上模擬曲線僅這一個(gè)可變的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的象差的復(fù)雜性說(shuō)明了為什么點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的實(shí)驗(yàn)測(cè)量是準(zhǔn)確占可能影響反褶積結(jié)果像差的優(yōu)選手段。 圖1（a）示出了無(wú)像差的共焦PSF在匹配指數(shù)介質(zhì)，沒有像差的存在。 點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的軸向程度明顯增加的焦點(diǎn)位置（通過(guò)第1（e）圖1（b））改變?yōu)楦钊氲匮刂鴝軸，點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)被移向物鏡。（本文來(lái)源：奧林巴斯顯微鏡文物和畸變的反卷積分析）

像差，很難檢查復(fù)雜樣品時(shí)，檢測(cè)變得非常清楚檢查從單一熒光珠產(chǎn)生的點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)時(shí)。 因此，在購(gòu)買一個(gè)昂貴的新的物鏡之前，建議從幾個(gè)物鏡點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)來(lái)獲取和比較，以幫助選擇系統(tǒng)與*理想的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的另一個(gè)好處是，它能夠使顯微鏡來(lái)測(cè)量成像系統(tǒng)的性能。 也會(huì)發(fā)生點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)采集過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能發(fā)生的許多潛在的問題，如舞臺(tái)漂移，燈的閃爍，照相機(jī)噪聲，折射率不匹配，和溫度波動(dòng)，而且更容易辨別。 因此，在實(shí)證的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)畸變建議如何改善顯微鏡拍攝的圖像的質(zhì)量。

當(dāng)獲得的經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，必須小心，以配合出現(xiàn)在原始圖像畸變。 理想的情況下，無(wú)論是原始圖像和點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)應(yīng)該是免費(fèi)的像差，但是，這并不總是可能的。 如果主要的像差是存在于原始圖像，那么他們應(yīng)該（如果可能）由像差的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)匹配。 否則，反卷積圖像可能包含錯(cuò)誤或恢復(fù)不佳。 此外，如果該點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)是喧鬧的，當(dāng)時(shí)的主要噪聲將出現(xiàn)在反卷積圖像。 為了減少噪音和消除輕微的畸變，許多軟件包徑向平均的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)或平均的幾個(gè)熒光珠的圖像來(lái)創(chuàng)建一個(gè)平滑的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。 許多商業(yè)軟件產(chǎn)品的另一個(gè)特點(diǎn)是，它們會(huì)自動(dòng)插采樣間隔的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的相匹配的采樣間隔把原始圖像的。 如果不是這樣，點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)和原始圖像必須在相同的采樣間隔被收購(gòu)。

當(dāng)使用一個(gè)理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的參數(shù)必須正確設(shè)置。 這些參數(shù)包括成像模態(tài)，數(shù)值孔徑，出射光的波長(zhǎng)，像素大小和z步長(zhǎng)大小，并且可以顯著地影響所得到的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的大小和形狀。 在一般情況下，隨波長(zhǎng)的增加而減小與數(shù)值孔徑的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的大小增加而增加。 像素大小和z步驟參數(shù)被用于相對(duì)于所述原始圖像縮放的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。

如果理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的大小和形狀是不恰當(dāng)?shù)脑紙D像，則工件可導(dǎo)致對(duì)各種原因。 首先，該算法解釋中的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)尺寸方面的采樣間隔的圖像。 第二，點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)確定的體積的大小和形狀從模糊的光被重新分配。 如果卷不對(duì)應(yīng)模糊的圖像中的真實(shí)分布，然后器物可以推出。 可能會(huì)發(fā)生這個(gè)錯(cuò)誤，如果有錯(cuò)誤縮放或像差的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。 它也可以導(dǎo)致如果圖像的“真正的點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)”具有未由算法生成的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)相匹配的像差。

在某些情況下，使用的是理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)時(shí)，更好的結(jié)果，可在點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)是顯然太大獲得的。 一種可能的解釋是，原始圖像的真實(shí)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)是大于預(yù)期。 這可能發(fā)生，因?yàn)檎凵渎实牟黄ヅ?，從而?dǎo)致球面像差和改變z軸縮放。 這兩種現(xiàn)象加寬真正的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)在z方向上，使它更大，從而降低了物鏡的有效數(shù)值孔徑。如果這種情況下，懷疑是，研究者應(yīng)該試圖減去一個(gè)小的增量（例如，0.05）的理論點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的數(shù)值孔徑。 在一些軟件包，類似的結(jié)果可以通過(guò)將點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的z步長(zhǎng)，以比實(shí)際的z步驟中獲取的原始圖像利用較小的獲得。

正常情況下，點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)的z步長(zhǎng)應(yīng)始終是相同的原始圖像的z步驟。 此小心確保該點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的標(biāo)度是合適的成像條件。 用經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，但是，有可能獲得更細(xì)的z軸分辨率比原始圖像中的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。 應(yīng)該提到，這招只有當(dāng)該軟件可以插采樣間隔的圖像，并使其對(duì)應(yīng)的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。

目前，大多數(shù)市售的反卷積軟件包假定點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)是恒定的所有點(diǎn)的對(duì)象，被稱為空間不變性的性質(zhì)。 光學(xué)顯微鏡通常滿足這個(gè)假設(shè)，但其他的問題，如折射率梯度的樣品材料或浸泡的不匹配和安裝介質(zhì)可以誘發(fā)空間變化的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，尤其是在厚厚的標(biāo)本。 目前，所有的商業(yè)軟件包假設(shè)空間不變性，但在未來(lái)（由于迅速增長(zhǎng)的計(jì)算機(jī)處理速度），也可能是可行的，通過(guò)圖像變化的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)。 它也可能成為可能通過(guò)采用透射光圖像映射折射率梯度的試樣，并相應(yīng)調(diào)整點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)來(lái)校正點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的空間變化。

球差

球面像差是點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)差的臭名昭著的形式，是*難以對(duì)付的。 該工件包括在點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，它們都增大了的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的喇叭形，并降低其亮度的形狀的軸向不對(duì)稱性。 在各種形式的光學(xué)顯微鏡的一個(gè)共同的問題，球面像差是退化的分辨率和信號(hào)損耗在兩個(gè)共焦和廣角調(diào)查的主要原因之一。 檢測(cè)球面像差可以通過(guò)集中上下貫通的試樣，在離焦的環(huán)的上方和下方的明亮的熒光點(diǎn)狀的細(xì)節(jié)（如示于圖2）觀察的不對(duì)稱性來(lái)實(shí)現(xiàn)。 或者，工件可以在所獲取的圖像堆棧（在XZ或YZ的突起）通過(guò)在模糊的光的周圍的熒光結(jié)構(gòu)的喇叭形搜尋在軸向不對(duì)稱性檢測(cè)。 第三種技術(shù)檢測(cè)球面像差的有用的是從一種熒光珠安裝類似的光學(xué)條件下的試樣根據(jù)獲得的點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)的圖像，并且搜索軸不對(duì)稱的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的喇叭形。

如果在觀察的標(biāo)本是比較厚的（大于10微米），球面像差可逐漸成像發(fā)生在試樣內(nèi)部更深層次的誘導(dǎo)。 因此，直屬蓋玻片表面貼裝珠可能不能揭示球面像差在這種情況下。 一個(gè)建議的補(bǔ)救措施是從靠近試樣中的所希望的圖像平面通過(guò)*暴露試樣的熒光珠的溶液用珠獲得的點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)的圖像。 然而，這點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)不應(yīng)該用于反褶積，因?yàn)閺慕M織散射會(huì)使點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)喧鬧得多，在大多數(shù)情況下。

球面像差是在成像系統(tǒng)中的光學(xué)路徑的缺陷所致。 它可以是由于在物鏡的缺陷，但更經(jīng)常的像差的發(fā)生是由于折射率的光學(xué)介質(zhì)直接相鄰的物鏡前透鏡元件的不匹配。 現(xiàn)代的物鏡通常被設(shè)計(jì)來(lái)校正和/或減少的球面像差，只有當(dāng)他們被用來(lái)與蓋玻片玻璃的適當(dāng)?shù)念愋秃秃穸?，以及適當(dāng)?shù)慕莺桶惭b介質(zhì)。 這些材料的光學(xué)特性是至關(guān)重要的光通過(guò)物鏡（和顯微鏡光學(xué)系列的其余部分）的正確聚焦。（本文來(lái)源：奧林巴斯顯微鏡文物和畸變的反卷積分析）

在圖2（牛肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞）呈現(xiàn)的圖像被收購(gòu)與寬視場(chǎng)熒光成像相似的條件下，除了浸油的折射率的變化的系統(tǒng)。 將原始圖像（*大強(qiáng)度投影），如圖2（a）所示的具有1.514的折射率的浸沒油被獲取，并且是自由可觀的球面像差。 圖2（b）是反卷積后的相同圖像。 類似的細(xì)胞，具有較高的折射率（1.524）的油狀物，并表現(xiàn)出顯著球面像差獲取的，如圖2（c）所示。 周圍的細(xì)胞周圍的點(diǎn)的衍射環(huán)是差的表現(xiàn)。 以下通過(guò)反復(fù)的約束反褶積（圖2（d）），恢復(fù)原始圖像的一個(gè)水平行的一個(gè)子體積的邊緣引入（以箭頭的右側(cè)）。此工件不存在于原始圖像（圖2（c）），并且，因此，不通過(guò)成像系統(tǒng)所造成的。

相當(dāng)普遍的生物學(xué)調(diào)查，浸泡和安裝介質(zhì)的折射率不相同，甚至接近。 在這些情況下，可能會(huì)發(fā)生兩種扭曲：球面像差和z軸距離的縮放比例。 這兩種現(xiàn)象取決于震源深度，所以在不同深度的功能將展示不同量的球面像差和z軸比例文物。 雖然z軸縮放不會(huì)影響分辨率或信號(hào)強(qiáng)度，但它代表z軸的距離測(cè)量的線性縮放由不匹配的介質(zhì)的折射率之比。 為了校正這種扭曲，Z-距離可以由標(biāo)量補(bǔ)償系數(shù)相乘，有些軟件包提供此功能。 在另一方面，球面像差是難以糾正，因此非常誘人忽視，但是也有少量的注意這個(gè)問題可以產(chǎn)生的圖像質(zhì)量有很大的提高，尤其是在弱光條件下，如在活細(xì)胞。

*近，一些研究已針對(duì)數(shù)位與球差的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)解卷積校正球面像差。 這需要解卷積軟件不能自動(dòng)進(jìn)行預(yù)處理的點(diǎn)擴(kuò)展函數(shù)以使其軸向?qū)ΨQ。 如果是這種情況，那么顯微鏡能精確地通過(guò)具有在手“家庭”的經(jīng)驗(yàn)點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)不同程度的球面像差，并選擇*合適的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的匹配在圖像和點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的像差給成像條件。 這種類型的計(jì)算修正的可能恢復(fù)丟失的分辨率在一定程度上，但它不會(huì)恢復(fù)丟失的信號(hào)。 因此，為了校正球面像差的*佳機(jī)制是通過(guò)光學(xué)方法預(yù)先消除神器。

有很多種由顯微鏡來(lái)校正球面像差的光學(xué)技術(shù)和技巧。 一對(duì)標(biāo)本浸泡在水溶液中*常見的應(yīng)用是浸油的物鏡，它可以直接進(jìn)入安裝介質(zhì)中無(wú)蓋玻片。 因?yàn)榻n和安裝介質(zhì)是相同的，沒有折射率不匹配是可能的。 然而，失真仍然可以發(fā)生，因?yàn)樵嚇雍统两橘|(zhì)之間或者由于試樣本身內(nèi)的折射率的梯度折射率失配。 另一種方法涉及調(diào)節(jié)浸沒介質(zhì)的折射率，以補(bǔ)償所述安裝介質(zhì)的折射率。 如果試樣被安裝在低折射率比玻璃的介質(zhì)（例如，甘油或水基介質(zhì)），則增加了浸沒介質(zhì)的折射率，減少或消除小程度的球面像差。 用具有1.4數(shù)值孔徑的物鏡時(shí)，該技術(shù)使一個(gè)相對(duì)無(wú)像差的成像條件達(dá)約10至15微米的蓋玻片的有限焦點(diǎn)深度和試樣安裝在甘油。 幾個(gè)商業(yè)供應(yīng)商現(xiàn)在提供浸沒介質(zhì)具有規(guī)定的折射率，可以混合以任何期望的中間值。

另一種常用的方法是使用一個(gè)專門校正物鏡，如高數(shù)值孔徑的水浸泡即日起接受報(bào)名與蓋下滑標(biāo)本的物鏡。這些物鏡有一個(gè)校正彩色，使補(bǔ)償透鏡元件和試樣之間的折射率的變化。 雖然他們都非常昂貴（目前約10,000美元），水浸的物鏡可以提供成像深度大于15微米成厚片，當(dāng)以消除球面像差的*方法。 對(duì)這些物鏡的修正衣領(lǐng)不應(yīng)該混淆與較便宜的暗場(chǎng)的物鏡找到了可變光圈校正衣領(lǐng)。

數(shù)字圖像采樣間隔

適當(dāng)?shù)牟蓸娱g隔在x，y和z方向上是不錯(cuò)的解卷積結(jié)果重要。 這是標(biāo)準(zhǔn)的做法，以獲取樣本可分辨的空間頻率的兩倍，這符合奈奎斯特采樣定理（每個(gè)元素解析兩個(gè)樣本都需要精確的檢測(cè)信號(hào)）。 然而，奈奎斯特采樣頻率是真的只是需要一個(gè)離散采樣機(jī)制取得的實(shí)際信號(hào)的合理近似*小。 更高的采樣頻率產(chǎn)生***的修復(fù)，應(yīng)用三維算法時(shí)尤其如此。 與此相反，二維去模糊算法*有效地工作，當(dāng)取樣率是較低的在z方向上（當(dāng)光學(xué)部之間的間距等于或大于分辨的元素）。

在熒光顯微鏡中，可分辨的元素通常使用的瑞利準(zhǔn)則來(lái)定義。 例如，與染料FITC（在520納米的發(fā)射峰），1.4數(shù)值孔徑的油浸物鏡，并用1.51的折射率（*匹配的光學(xué)玻璃）的安裝/浸沒介質(zhì)，所述解析單元尺寸為227納米的（根據(jù)瑞利準(zhǔn)則）的xy平面和801納米的在z方向上。 樣品在這些條件下的奈奎斯特頻率，采樣間隔應(yīng)為這個(gè)值的一半，或在xy平面和0.4微米的在z方向上約0.114微米。 提供在圖像恢復(fù)的*佳效果，取樣在一個(gè)較小的間隔建議，也許0.07微米的在xy平面和0.2微米的在z方向上，在相同的條件下。

應(yīng)當(dāng)指出，這些準(zhǔn)則是*佳設(shè)置，并應(yīng)通過(guò)考慮所研究的特定制劑的平衡。 作為一個(gè)例子，熒光信號(hào)可以是如此之低（常出現(xiàn)在活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)）的CCD的像素的像素合并這是必需的，或者可以如此之快，以至于沒有足夠的時(shí)間，以在z方向上精細(xì)樣品發(fā)生的事件。 在這種情況下，*理想的采樣間隔是必需的。 幸運(yùn)的是，修復(fù)算法仍然可以工作相當(dāng)會(huì)在這些條件下，雖然在正則有些變化可能是必要的，一些算法。

振鈴和邊緣文物

振鈴是在去模糊或反演技術(shù)的應(yīng)用主要是遇到了一個(gè)神器，但它也可能發(fā)生與迭代法。 該工件具有深色和淺色的漣漪周圍的圖像的明亮的外觀特征，如圖3所示，并且可以既在z方向上和在xy平面內(nèi)發(fā)生。 當(dāng)在z方向上可視化，振鈴出現(xiàn)在更深的z截面的陰影，概述熒光結(jié)構(gòu)。

振鈴的源通常是轉(zhuǎn)化的不連續(xù)信號(hào)進(jìn)入或離開傅立葉空間。 一些相關(guān)的問題可以產(chǎn)生信號(hào)的不連續(xù)性，因此有助于振鈴。 不連續(xù)性可能發(fā)生在圖像的邊緣或圖像的子體積的（圖2）或者甚至在明亮的特征的邊緣（圖3）。 不連續(xù)性的另一來(lái)源是將原始圖像或點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，在嘈雜的圖像或點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)和點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的形狀，是不恰當(dāng)?shù)膱D像的空間采樣不足。

在圖3所示的每個(gè)圖像是從圖像的三維堆疊的單個(gè)代表性的光學(xué)部分，并示出了從固定部金字塔細(xì)胞樹突。 的原始圖象被顯示在圖3（a）所示，而圖3（b）是同一圖象場(chǎng)以下迭代解卷積。 在反卷積圖像，顯著振鈴發(fā)生（約熒光樹枝狀暗輪廓），*有可能的，因?yàn)榍蛎嫦癫钪械脑紙D像，它是不是在點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)匹配。 在相同的圖像，噪聲放大顯示為背景的斑點(diǎn)。

為了避免振鈴*好的辦法是確保傅立葉適當(dāng)開窗變換。 盡管一些商業(yè)軟件包都沒有解決這個(gè)問題，它正變得越來(lái)越常見于高端的算法實(shí)現(xiàn)。 振鈴也可避免使用更精細(xì)的采樣間隔中的圖像或點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，通過(guò)平滑的圖像或點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，以在與這些圖像的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)精心匹配的像差，或通過(guò)調(diào)整該點(diǎn)的傳播函數(shù)的參數(shù)。

振鈴的圖像的邊緣可以通過(guò)簡(jiǎn)單地去除邊緣被抑制。 許多算法消除圍繞整個(gè)圖像8至10像素或飛機(jī)保護(hù)帶 。該操作需要空白空間的上方和下方的熒光結(jié)構(gòu)的圖像中要保留。 空白空間是不可取的，因?yàn)閺纳厦婧拖旅娴膶?duì)象模糊的光可被重新分配，并有助于該信號(hào)為對(duì)象。 然而，空白空間可以人工創(chuàng)建的，而不保真度的損失，通過(guò)將內(nèi)插平面到圖像堆棧的頂部和底部。 在計(jì)算機(jī)的存儲(chǔ)器和處理時(shí)間所得的成本可以通過(guò)在傅立葉空間中進(jìn)行的內(nèi)插被*小化。

振鈴子卷的邊緣是一個(gè)類似的問題（見圖2）。 通常情況下，亞體重疊量可提高到取出神器。 或者，如果足夠的隨機(jī)存取存儲(chǔ)器（RAM）被安裝，則整個(gè)圖像可以被處理為一個(gè)單一的體積，以避免偽像。

噪聲放大和過(guò)度平滑

如前面所討論的，噪聲放大是由去模糊和反演算法一個(gè)工件。 神器也會(huì)發(fā)生與迭代算法的重復(fù)卷積運(yùn)算引入的高頻噪聲。 噪聲圖像反褶積表現(xiàn)為圖像，往往是在每一個(gè)平面不變的，是特別引人注目的背景區(qū)域的顯著斑點(diǎn)。 它通?？梢酝ㄟ^(guò)應(yīng)用平滑濾波器或一個(gè)正規(guī)化（ 粗糙度 ）濾波器抑制。 在過(guò)度的噪音是在一個(gè)反褶積圖像中觀察到的情況下，然后朝一個(gè)補(bǔ)救措施的*步是確保點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)為噪音盡可能免費(fèi)。 接著，檢查算法過(guò)濾器和嘗試優(yōu)化他們的可調(diào)參數(shù)，使圖像功能比分辨率限制的維持，而較小的變化被抑制。 不要增加平滑太多，因?yàn)檫^(guò)度的平滑特性會(huì)降低圖像的分辨率和對(duì)比度。

消失和爆炸特性

也許是反褶積的*討厭的文物是非常暗淡的功能明顯損失或非常明亮的特點(diǎn)炸毀 （開花或?qū)Ρ榷缺ǎ?/span> 這些工件不同于過(guò)多引起的平滑的，因?yàn)樗鼈冇绊懙教囟ǖ墓δ埽▓D4），相對(duì)于該圖像作為一個(gè)整體。 在這種情況下，作出嘗試來(lái)比較不同的算法對(duì)工件的外觀（如逆濾波器對(duì)迭代算法，或古典與統(tǒng)計(jì)算法）的影響。如果神器只出現(xiàn)一個(gè)單一的算法，那么原因可能是不穩(wěn)定的算法或算法對(duì)特定樣品類型的特定效果。 在其中的影響發(fā)生與幾種算法的情況下，則有多種可能的來(lái)源。 當(dāng)圖像小，昏暗的特征正在消失，其原因往往是非負(fù)性和平滑濾波器的組合。 這是可能的，如果有過(guò)多的噪音圖像或點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)發(fā)生，或者如果情況有利于振鈴。 噪聲和振鈴可誘導(dǎo)的負(fù)像素值，以使非負(fù)性約束被調(diào)用和功能被分散。 如果發(fā)生這種情況，平滑濾波器可以移除或平滑許多剩余的片段，產(chǎn)生該特征的消失。 工件的嚴(yán)重性可以補(bǔ)償（或者它可以完全被消除），通過(guò)減少圖像中的噪聲和點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)（具有更長(zhǎng)的曝光時(shí)間，或通過(guò)平均），通過(guò)消除點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的不匹配，并通過(guò)適當(dāng)調(diào)節(jié)平滑篩選。

圖4示出相似于一個(gè)先前顯示（圖3）的光學(xué)部分的放大的細(xì)節(jié)。 三個(gè)擴(kuò)印被從原始圖像拍攝之前，反卷積（圖4（a），上游），以及反卷積得到越來(lái)越多的迭代之后（250和300的迭代;圖4（b）和4（c））。 一個(gè)小的特征，由箭頭表示，消失的迭代解卷積的結(jié)果。 可避免的點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的正確應(yīng)用這種類型的神器。

當(dāng)明亮的特點(diǎn)是擴(kuò)大一個(gè)反褶積的圖像，則源可能是像素的飽和度。 包含一個(gè)顯著一些明亮的特點(diǎn)RAW圖像都會(huì)有這樣的亮度還原過(guò)程中進(jìn)一步擴(kuò)展。 然而，在非常明亮的特性，反卷積算法可導(dǎo)致像素值*過(guò)在給定的位深度的*高值表示的。 實(shí)際上，這些像素將飽和 ，將被分配的*大值。 那么該功能將變得非常明亮，會(huì)出現(xiàn)扁平化，并在規(guī)模可能擴(kuò)大。 神器可避免利用攝像頭和軟件，將允許更大的位深度和一種算法，在內(nèi)部存儲(chǔ)數(shù)據(jù)為浮點(diǎn)數(shù)。 使用這些技術(shù)擴(kuò)展計(jì)算機(jī)存儲(chǔ)器的要求，但可防止這樣的偽影的發(fā)生。

標(biāo)本依賴文物

科學(xué)文獻(xiàn)的成熟與一些標(biāo)本類型，但不與他人觀察到反褶積文物的報(bào)道。 特別是，一些研究者已經(jīng)報(bào)道，絲狀結(jié)構(gòu)分散的一類卷積算法，但不與另一種。 如果一個(gè)結(jié)構(gòu)變化觀察，那么它始終是*好比較反褶積和原始圖像。 如果仔細(xì)觀察發(fā)現(xiàn)，反褶積后的結(jié)構(gòu)特征明顯不會(huì)出現(xiàn)在原始圖像，然后點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)的參數(shù)進(jìn)行檢查，以確定其正確的設(shè)置，點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)也應(yīng)審查的噪音。 如果問題仍然存在，那么整個(gè)算法是嫌疑人，不同的算法對(duì)神器的外觀效果應(yīng)該比較。 此程序?qū)Ⅱ?yàn)證由一個(gè)給定的算法的特定樣品是否恢復(fù)到令人滿意的程度。

當(dāng)一個(gè)明顯的神器是可見的兩個(gè)反褶積和RAW圖像，然后試樣制備或光學(xué)像差的某些方面被牽連。 特別是，免疫熒光染色往往是不連續(xù)的沿細(xì)胞骨架絲（肌動(dòng)蛋白絲，微管和中間絲）。 一些消息來(lái)源可以有助于這一問題。 之一是細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白可能掩蓋細(xì)胞骨架細(xì)絲，使抗體可訪問性是沿?zé)艚z變量。 另一個(gè)來(lái)源是在免疫細(xì)胞化學(xué)使用的固定劑，它往往不如實(shí)地保留絲狀結(jié)構(gòu)。 例如，微管可在甲醛或甲醇固定片段。 一個(gè)更忠實(shí)的固定劑如戊二醛可以采用，但在抗原性為代價(jià)的。 *佳的固定方法是在各種文獻(xiàn)來(lái)源和教科書中描述。

標(biāo)本相關(guān)文物的一個(gè)常見來(lái)源源于折射率梯度的標(biāo)本本身。 在試樣這些原因透鏡效應(yīng)光之前到達(dá)物鏡，因此，可能會(huì)扭曲的形象。 一些標(biāo)本（例如，胚胎和厚組織）有卵黃顆?；蚱渌?xì)胞器，其折射率顯著不同于周圍的細(xì)胞質(zhì)。 此外，可能存在折射率梯度所造成的安裝介質(zhì)的均相混合的裝試樣。 這件神器是特別容易，如果試樣安裝在其以前沒有浸泡的媒介。 計(jì)算方法為糾正這種異質(zhì)性可能提供在未來(lái)，但它始終是一個(gè)很好的做法徹底浸泡標(biāo)本中被很好地匹配到試樣本身的折射率的安裝介質(zhì)，以盡量減少這些文物。 作為補(bǔ)充措施，這是明智的調(diào)整浸入介質(zhì)的折射率（如果可能），以補(bǔ)償該安裝介質(zhì)。

水平線和垂直線

大概解卷積顯微術(shù)的*常見的偽影是在x，y和z軸的水平線和垂直線。 在許多情況下，這些線路可以在當(dāng)它被仔細(xì)研究的原始圖像被觀察到的，這表明它們不是反卷積操作的結(jié)果，而是由算法被增強(qiáng)。 線或條帶也可能來(lái)自于子卷，振鈴形式之間的界限邊緣的文物。 在任何情況下，這樣的工件都難以誤認(rèn)為是生物結(jié)構(gòu)，可以很容易除去。

在xy平面水平或垂直的線條往往是由于CCD傳感器用來(lái)記錄影像柱缺陷 。 如果在芯片的讀出寄存器中的一個(gè)像素的缺陷，或者如果傳遞到該像素是低效率的，那么結(jié)果可能顯示為垂直于所讀取的寄存器的一行。 這條線，然后由卷積運(yùn)算增強(qiáng)。 如這個(gè)問題通常可以用一臺(tái)調(diào)遣的操作來(lái)校正，也稱為陰影或背景校正，并且被包括在大多數(shù)反卷積軟件包。

在XZ或YZ的視圖（稱為Z-線 ）觀察到的垂直線是由于變化的各個(gè)像素的響應(yīng)特性。 每個(gè)像素具有一個(gè)稍微不同的增益和其鄰國(guó)的偏移。 在極端情況下，也有不好的像素 ，其光子響應(yīng)從他們的鄰居顯著偏離。 通常，在相同的像素系統(tǒng)從其鄰居偏離整個(gè)堆棧的圖像，剩下的z線。 這個(gè)問題可以通過(guò)平場(chǎng)作業(yè)或由搜索出這些匪徒，并將其與自己的近鄰均值代替專門的壞像素例程進(jìn)行修正。

與此相反，在XZ或YZ意見水平線代表在圖像堆棧是比他們的鄰居均勻明亮的整個(gè)平面。 這個(gè)問題是由于在該照明系統(tǒng)的波動(dòng)。 在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中的弧光燈的功率輸出偏離的情況，那么這種變化將被記錄在平面之間的熒光強(qiáng)度的系統(tǒng)性差異。 此外，電弧在燈可以漫步在電極的表面上，誘導(dǎo)時(shí)間依賴性的空間不均勻性在試樣的照明。 這些活動(dòng)將通過(guò)反褶積會(huì)加重，但可在原始圖像進(jìn)行觀察。 這兩個(gè)問題通?？梢酝ㄟ^(guò)更換弧光燈被*小化。

如果燈的波動(dòng)仍然是，即使有新的弧光燈，然后直接測(cè)量弧光燈功率波動(dòng)的結(jié)合的總的像素強(qiáng)度的平面由平面可被用來(lái)校正應(yīng)用到原始圖像中的多項(xiàng)式擬合的一個(gè)問題。 這種類型的校正的某種形式被包括在大多數(shù)市售的反卷積包。 第二個(gè)問題，由于電弧徘徊變化的照明圖案，難以校正由圖像處理，但是可以通過(guò)安裝弧光燈和顯微鏡垂直照明器之間的光纖加擾器來(lái)消除。