透射光顯微鏡科勒照明的調(diào)整是應(yīng)該實(shí)行，直至顯微鏡的所有嚴(yán)肅的學(xué)生掌握了邏輯和相對(duì)容易的過(guò)程。 在顯微鏡被接通每次，應(yīng)該仔細(xì)檢查，以確保所有的光學(xué)元件的正確對(duì)準(zhǔn)，并保證在燈的中心與所述聚光鏡和視場(chǎng)光闌被正確調(diào)整為科勒照明。

在圖1所示的顯微鏡采用了*的外部光源提供照明的顯微鏡。 燈殼體包含一個(gè)視場(chǎng)光闌和聚光透鏡，除了鎢 - 鹵素?zé)襞荨?/span> 一個(gè)單獨(dú)的電壓調(diào)節(jié)器提供可調(diào)節(jié)的直流電壓源，該5和12伏之間變化的燈。 現(xiàn)代顯微鏡通常包含內(nèi)置到顯微鏡的基礎(chǔ)上，沿與會(huì)聚透鏡和視場(chǎng)光闌的光源。 顯微鏡用內(nèi)部或外部光源科勒照明調(diào)整在理論上是相似的，但也有在下面將要描述的過(guò)程的某些差異。

在顯微鏡下，無(wú)論是對(duì)于克勒Nelsonian，或任何其它策略用于照明的對(duì)準(zhǔn)的一個(gè)重要步驟，是在光源（通常是鎢 - 鹵素?zé)襞荩┑膶?duì)準(zhǔn)。 許多現(xiàn)代顯微鏡現(xiàn)在有預(yù)中心和預(yù)聚焦燈，但是老款車型仍然需要光源為中心，重點(diǎn)用戶。 我們建議您咨詢的車主手冊(cè)中的說(shuō)明有關(guān)如何燈為中心，并為其他有關(guān)照明光源的重要信息。 下面的程序建議對(duì)齊外部和內(nèi)部的燈：

內(nèi)部鹵鎢燈

• 后在顯微鏡上，完全打開兩個(gè)視場(chǎng)光闌（通常接近顯微鏡的光端口）和聚光鏡孔徑光闌（由套環(huán)控制或處理上的聚光器殼體）的燈開關(guān)。

• 有些廠家為擴(kuò)散光從燈泡發(fā)出提供一個(gè)磨砂玻璃過(guò)濾器。 這個(gè)過(guò)濾器通常位于鄰近所述燈殼在那里它被安裝在顯微鏡的主體中的過(guò)濾器保持器。 在進(jìn)行燈對(duì)準(zhǔn)前除去此過(guò)濾條件。

• 放置一個(gè)片的白紙，磨砂玻璃，劍擦拭，或鏡頭清潔紙顯微鏡端口和燈絲的圖像將如圖2清晰可見。

• 使用在燈殼體上的調(diào)節(jié)螺釘旋轉(zhuǎn)燈（因此，長(zhǎng)絲）在其保持器也進(jìn)行移動(dòng)前后或上下移動(dòng)。 我們已經(jīng)構(gòu)建了一個(gè)互動(dòng)的Java教程的評(píng)論燈絲定位的基礎(chǔ)知識(shí)。 正確地操縱燈殼體調(diào)整的組合應(yīng)確保燈絲是集中在光路徑和聚焦的聚光鏡的孔徑光闌。

圖3示出了當(dāng)燈絲采用上面描述的程序是可見的顯微鏡光端口的典型視圖。 在左側(cè)圖3中的端口（a）包含細(xì)絲是嚴(yán)重失準(zhǔn)和位置不正確聚焦，將完全填充孔徑光闌物鏡的，也不是后焦平面的圖像。 使用在燈殼體平移調(diào)整，燈絲被聚焦（圖3（b）），然后將光口內(nèi)的中心（圖3（c））。 游客和學(xué)生可以練習(xí)使用對(duì)準(zhǔn)下面的交互式Java教程“虛擬”燈絲：

外部鎢及鎢鹵素?zé)襞?/strong>

• 大多數(shù)外部光源是老年人和沒(méi)有預(yù)先為中心的燈泡。 在定心外部鎢 - 鹵素?zé)舻?個(gè)步驟是預(yù)測(cè)燈絲的圖象復(fù)印在一個(gè)遙遠(yuǎn)的片材，由一本書或壁支承。 使用調(diào)整螺釘或旋鈕繞其自身軸線的長(zhǎng)絲，并確保它被聚光透鏡和視場(chǎng)光闌，它們是外部照明源的一個(gè)組成部分的光軸的中心。

• 放置在外部照射約7-10英寸的距離反射鏡位于該顯微鏡的基座直接下方的聚光器上（參見圖1）。許多關(guān)于設(shè)計(jì)用于外部光源的顯微鏡鏡是平凹并具有一個(gè)平面（平面）和一個(gè)凹邊。 肯定的是，光源是從所述反射鏡的平坦表面使用外部鎢鹵素光源時(shí)反射。



• 燈絲應(yīng)在鏡子為中心，如圖所示4。 這可以以類似于內(nèi)部燈的方式通過(guò)將一塊紙巾在鏡子和可視化，其中長(zhǎng)絲圖像投影進(jìn)行檢查。 進(jìn)行任何必要的調(diào)整，以使外部照明與顯微鏡的光學(xué)軸線。 定心燈絲后，反射鏡的位置應(yīng)以投影反射到聚光器。 通過(guò)將一塊紙巾在載物臺(tái)開幕檢查。 燈絲應(yīng)該是失焦，但在載物臺(tái)開口的中心方形框。

聚光鏡和視場(chǎng)光闌的對(duì)齊方式

• 旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器帶來(lái)10倍的物鏡入光路。 下一步，將標(biāo)本在顯微鏡載物臺(tái)上，并使用了粗，細(xì)調(diào)焦旋鈕聚焦顯微鏡。 這應(yīng)該是通過(guò)緩慢升高顯微鏡載物臺(tái)，同時(shí)觀看滑動(dòng)，直到它非常接近完成（但不接觸！）的物鏡。 在這一點(diǎn)上，本階段將要稍微降低 ，使樣品聚焦。 這是，當(dāng)正確實(shí)施，將避免物鏡和標(biāo)本蓋玻片之間的沖突的一個(gè)重要概念。 看看通過(guò)目鏡觀察，慢慢地降低載物臺(tái)，用細(xì)調(diào)焦旋鈕，直到試片細(xì)節(jié)成為焦點(diǎn)。 試樣應(yīng)具備足夠的對(duì)比度，提供清晰，明快的圖像。 一個(gè)高度染色生物組織樣品是優(yōu)良的用于明場(chǎng)模式對(duì)準(zhǔn)顯微鏡，但光學(xué)雙折射的樣品也可用于當(dāng)在顯微鏡配備為偏振光或微分干涉對(duì)比。

• 雙目顯微鏡，調(diào)整眼管與您的瞳距一致。 單一的融合圖像應(yīng)通過(guò)兩只眼睛是不可見的頭部顯著運(yùn)動(dòng)，觀看應(yīng)該是舒適。 如果只有一個(gè)人使用的顯微鏡，這種調(diào)整不應(yīng)該要經(jīng)常做。 許多望遠(yuǎn)鏡頭具有分級(jí)量表（圖5），對(duì)應(yīng)于瞳孔間距離的大小，使顯微鏡來(lái)快速調(diào)整眼管不查看通過(guò)它們（平均瞳孔間距為65毫米）。



• 在現(xiàn)代顯微鏡，眼管類似雙筒望遠(yuǎn)鏡的方式進(jìn)行調(diào)整。 然而，在許多老機(jī)型，眼管來(lái)回滑動(dòng)在一個(gè)單一的平面，并調(diào)整它們可能涉及輕微改變顯微鏡鏡筒長(zhǎng)度。 不管翻譯機(jī)制，管子應(yīng)該被定位在一個(gè)距離，該距離能舒適地觀看。 接著，旋轉(zhuǎn)包含畢業(yè)規(guī)則或顯微攝影，直到分劃板標(biāo)記出現(xiàn)在大家關(guān)注的焦點(diǎn)疊加在一個(gè)集中的標(biāo)本目鏡的眼球晶狀體。 如果沒(méi)有標(biāo)線存在，轉(zhuǎn)動(dòng)眼球晶狀體，直到樣本的焦點(diǎn)。

• 屈光度調(diào)節(jié)應(yīng)單獨(dú)向目鏡。 一些顯微鏡對(duì)每個(gè)目鏡分級(jí)刻度，指示相對(duì)于所述目鏡的主體的眼透鏡的位置。 其它模型保持目鏡的身體在一個(gè)固定的位置牢固地固定在眼管子的銷和槽。 *步是要么排隊(duì)上裝備有這種標(biāo)記的目鏡分級(jí)標(biāo)記或轉(zhuǎn)動(dòng)眼透鏡順時(shí)針*短焦距位置。 接著，集中樣品與10倍的物鏡，然后旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換直到下一個(gè)放大倍數(shù)的物鏡（通常為5倍）為試樣的上方。 在這一點(diǎn)上，單獨(dú)重新調(diào)整每只眼睛晶狀體（不使用顯微鏡粗或細(xì)的重點(diǎn)機(jī)制），直到試樣是在大家關(guān)注的焦點(diǎn)。 旋轉(zhuǎn)20倍物鏡移入光路和調(diào)整顯微鏡的微調(diào)旋鈕。 重復(fù)的眼睛屈光度調(diào)整鏡頭與5倍的物鏡（再次不擾民顯微鏡精細(xì)調(diào)焦機(jī)構(gòu)），并在顯微鏡應(yīng)調(diào)整到正確的屈光度設(shè)置。 這些設(shè)置會(huì)有所不同從用戶到用戶，所以記錄的眼透鏡的位置，如果目鏡有一個(gè)漸變的規(guī)?？焖俜祷氐竭m當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

• 正確的屈光度調(diào)節(jié)允許在用戶的左眼和右眼的任何差額補(bǔ)償，使整個(gè)視場(chǎng)通過(guò)兩個(gè)目鏡出現(xiàn)在大家關(guān)注的焦點(diǎn)。 這也使顯微鏡通過(guò)在物鏡轉(zhuǎn)換器的所有不同的物鏡保持齊焦。 目鏡視度調(diào)節(jié)也可以彌補(bǔ)常見的視力問(wèn)題，如遠(yuǎn)或近近視，允許用戶查看樣本沒(méi)有眼鏡。 然而，這些目鏡調(diào)整不會(huì)彌補(bǔ)散光，強(qiáng)迫用戶有眼睛缺陷檢查標(biāo)本時(shí)必須佩戴眼鏡。

• 接下來(lái)的一步是慢慢關(guān)閉視場(chǎng)光闌（調(diào)整可以是對(duì)外部燈殼體或在靠近光端口顯微鏡的基座）到它的*小設(shè)定值，直到只有一個(gè)模糊的輪廓示出了在視場(chǎng)（圖6（a ））。 臺(tái)下聚光器裝上（通常）控制的滾花旋鈕上下運(yùn)動(dòng)相對(duì)于載物臺(tái)，一個(gè)機(jī)架上。 調(diào)整此旋鈕，直至視場(chǎng)光闌葉片是大家關(guān)注的焦點(diǎn)，對(duì)已經(jīng)為重點(diǎn)的試樣頂部，然后用聚光器螺絲，將視場(chǎng)光闌的圖像移動(dòng)到視場(chǎng)中心（與光軸顯微鏡 - 圖6（b））。

• 當(dāng)提升或降低聚光鏡聚焦視場(chǎng)光闌葉片，所述彈性膜片的聚焦圖像可以具有圍繞該葉片紅色或藍(lán)色的暈。 這是由于缺乏校正為在聚光鏡色差。 具有良好的校正聚光鏡將產(chǎn)生很少或沒(méi)有顏色膜片一個(gè)非常尖銳的輪廓。 視場(chǎng)光闌現(xiàn)在打開直到大約四分之三的視場(chǎng)中是可見的，聚光鏡，然后重新聚焦（圖6（c））。 檢查聚光鏡的對(duì)齊方式，必要時(shí)重新調(diào)整。 現(xiàn)在打開的視場(chǎng)光闌，直到它剛好*出視場(chǎng)（觀察），或在顯微攝影的情況下，剛好*出光罩標(biāo)記定義捕獲膜的面積。 打開視場(chǎng)光闌任何更遠(yuǎn)是不必要的，會(huì)導(dǎo)致過(guò)多的眩光和對(duì)比度損失。



• 下一個(gè)步驟是除去目鏡1和同行向下顯微鏡的管，如圖7（a）所示。 當(dāng)你查看下管，打開和關(guān)閉聚光鏡孔徑光闌看到自己的形象在物鏡的后焦平面。 如果有內(nèi)置到在顯微鏡底座上的光路中的磨砂玻璃漫射器濾波器，光的均勻發(fā)光的圓圈將是可見的。 如果沒(méi)有這樣的過(guò)濾器在光路中，你反而會(huì)看到燈絲的形象，在圖7（b）所示（以取代被刪除的目鏡，或勃氏鏡插入定心或相位望遠(yuǎn)鏡將使這次調(diào)整更容易看到）。

• 這個(gè)動(dòng)作的目的是設(shè)置孔徑光闌的大小，以*大化圖像的對(duì)比度，并獲得試樣的*佳圖像，而不會(huì)引入分辨率的損失，由于折射和衍射的工件。 一般的經(jīng)驗(yàn)法則是設(shè)置60和90％的整個(gè)光盤看出，在目鏡管的大小之間的孔徑光闌。

在一些情況下，部分封閉的孔徑光闌的邊緣不是同心的物鏡的照明系統(tǒng)后焦平面。 這是因?yàn)闊o(wú)論對(duì)臺(tái)下聚光器或物鏡的錯(cuò)位，以及制造商的使用說(shuō)明書應(yīng)征詢正確的定心制度。 有些顯微鏡是在一個(gè)固定的中心位置那是不可能在實(shí)驗(yàn)室中改變出廠時(shí)的孔徑光闌。 暗場(chǎng)和相襯聚光鏡通常總是將提供一個(gè)定心機(jī)構(gòu)，由于這一步設(shè)立顯微鏡對(duì)這些照明方式的重要方面。 聚光鏡光圈應(yīng)該用40倍或60倍的物鏡為中心，以避免重新中心的每一個(gè)物鏡（低倍率物鏡，將使用這種方法幾乎總是落在可以接受的邊界內(nèi)）的隔膜。

現(xiàn)在，科勒照明已經(jīng)建立了10倍的物鏡，就必須牢記的是，改變到一個(gè)更高的倍率物鏡將需要外地和孔徑光闌的重新調(diào)整。 例如，如果你切換到40倍的物鏡，你將不得不有點(diǎn)接近視場(chǎng)光闌和重新中心吧（看樣品的一個(gè)較小的區(qū)域）。 還有，聚光鏡孔徑光闌應(yīng)稍微打開（在40×物鏡具有更高的數(shù)值孔徑比不10x物鏡）。 物鏡的每次改變，兩個(gè)隔膜，必須根據(jù)上面概述的步驟來(lái)調(diào)節(jié)。

科勒照明的條件并不在倍率使用較低倍率的物鏡（5倍以下）適用。 在準(zhǔn)備低倍鏡，先對(duì)準(zhǔn)顯微鏡，并使用10倍的物鏡調(diào)整光學(xué)通路進(jìn)行適當(dāng)?shù)目评照彰鳌?/span> 大多數(shù)現(xiàn)代顯微鏡聚光鏡具有頂透鏡旋出光路的使用與5倍的放大倍率的物鏡和下方，如圖8中所示。 其他聚光鏡型號(hào)有*鏡頭，可以擰松或有聚光鏡的旋轉(zhuǎn)炮塔與低和高放大倍率的物鏡使用。

當(dāng)旋開式透鏡從光路取出，聚光鏡的性能從根本上改變，并且孔徑光闌不再起作用，以控制照明光的數(shù)值孔徑。 為了避免漸暈，聚光鏡孔徑光闌應(yīng)打開到其*寬的設(shè)定，標(biāo)本對(duì)比度控制與視場(chǎng)光闌，它現(xiàn)在控制照明光的數(shù)值孔徑。

通過(guò)適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)顯微鏡科勒照明，樣品將被充分照射均勻，無(wú)眩光，提供良好的圖像分辨率和對(duì)比度。 欲了解更多信息，請(qǐng)咨詢我們的理論部分科勒照明和/或基礎(chǔ)知識(shí)顯微鏡照明 。 關(guān)于顯微鏡照明的參考材料，也可以在我們的發(fā)現(xiàn)參考書目并在部分網(wǎng)絡(luò)資源 ，其中包含指向其它顯微鏡的網(wǎng)站。