高壓冷凍（HPF）是一種低溫定影法主要用于生物樣品，但也適用于各種非生物材料。它是能產(chǎn)生最佳保存在許多細(xì)胞類型和組織中或在有機和無機復(fù)合材料的技術(shù)。最常見的是，高壓冷凍樣品用經(jīng)適當(dāng)處理的光或電子顯微鏡進(jìn)一步分析。為解決該采用HPF應(yīng)用過多，有各種樣品的載體和試劑盒的系統(tǒng)。成功冷凍的一個重要方面是正確的和快速的處理樣品之前實際凍結(jié)。一個方面是不同的載流子的填充和組裝。

徠卡EM HPM100扁試樣系統(tǒng)

徠卡顯微鏡這個系統(tǒng)是最常用的，它存在于兩個變體：平檢體系統(tǒng)適用于3 mm的載體和用于6毫米載體。它適合的利用不同的培養(yǎng)細(xì)胞類型，細(xì)菌，藻類，動物和植物組織，等。樣品凍結(jié)在平板樣品載體通常進(jìn)一步在冷凍置換部和樹脂嵌入處理的冷凍應(yīng)用的陣列。

良好的冷凍樣品需要仔細(xì)地選擇冷凍冷凍保護(hù)/填充劑和特定的處理之前，以確保樣品的最佳的生理狀態(tài)，以及正確的處理，將來自抽樣變化進(jìn)行采樣。我們不會詳細(xì)說明這些細(xì)節(jié)，但我們必須強調(diào)其重要性，并強烈建議進(jìn)一步閱讀關(guān)于這個問題的。  

填補了運營商的時候簡單的規(guī)則：

避免過滿或欠填充作為運營商既會導(dǎo)致較差的冷凍效果。

避免樣品的機械損傷卻使載體，因為這會導(dǎo)致次優(yōu)的質(zhì)量

總是試圖找到樣本量和載大小之間的最佳關(guān)系。

定時是必要的。樣品操縱應(yīng)減少到可能的最低水平。

徠卡EM HPM100管系統(tǒng)

管系統(tǒng)適合于在懸浮液中的樣品，但它主要是用于CEMOVIS應(yīng)用（低溫電子顯微玻璃體部分中）。這種方法允許樣本完全水合和最小的，接近無分子聚合的研究。因此，當(dāng)涉及到他們的原生狀態(tài)解決的分子結(jié)構(gòu)是首選的方法。對于這個特定的應(yīng)用程序?qū)悠穭偤脙鼋Y(jié)之前與葡聚糖混合，以20％的終濃度。

一旦凍結(jié)的樣品可以被修整（銅容易被金剛石刀修整而不引起任何損害）并切片在冷凍超薄切片。有關(guān)詳情請參閱“簡介高壓凍結(jié)”。

填充管時，簡單的規(guī)則：

避免氣泡被截留，因為這會損害冷凍結(jié)果

避免保持樣品葡聚糖混合物太長凍結(jié)，因為這將導(dǎo)致在干燥的工件之前，并且影響樣品的生理狀態(tài)。

藍(lán)寶石系統(tǒng)6毫米徠卡EM HPM100

藍(lán)寶石光盤適合貼壁單層或CLEM（相關(guān)光學(xué)和電子顯微鏡）的應(yīng)用研究。藍(lán)寶石具有優(yōu)異的熱性能，是光鏡觀察或光刺激的應(yīng)用非常方便。

填充管時，簡單的規(guī)則：

避免氣泡組裝兩個藍(lán)寶石的時候，因為這會損害冷凍效果，并可能導(dǎo)致藍(lán)寶石粉碎被困。

避免保持準(zhǔn)備藍(lán)寶石樣本藍(lán)寶石組件太長凍結(jié)，因為這將影響樣品的生理狀態(tài)之前。

確保載體的細(xì)胞被標(biāo)記以適當(dāng)?shù)姆绞剑ɡ?，碳涂覆的圖案），所以它可以很容易地在冷凍后和進(jìn)一步加工期間進(jìn)行區(qū)分的藍(lán)寶石

確認(rèn)

我們感謝渡邊茂樹，美國猶他州大學(xué)的博士，他對影片的貢獻(xiàn)。